Newsletter // Junio 2013 // Número 11 - info.argentina@ceva.com.ar  
     
 
 
Monitoreo de la vacuna vectorizada Vectormune ND mediante métodos serológicos Ceva – Phylaxia

Por Med. Vet. Lucas Sara, Ceva Salud Animal

El objetivo de este trabajo fue demostrar que la respuesta inmune a Vectormune ND es más confiable y previsible que la respuesta inmune a las vacunas convencionales para el control de la enfermedad de Newcastle.

Con este fin, se realizó en los laboratorios de Ceva Phylaxia en Budapest, Hungría, una comparación de los diferentes métodos serológicos para la detección de la respuesta inmune humoral, luego de la vacunación de pollos parrilleros comerciales con Vectormune ND. Para este propósito se utilizaron dos kits de ELISA para la enfermedad de Newcastle (Idexx y BioCheck) y fueron comparados con la prueba estándar de Inhibición de la Hemaglutinación (HI).
El ensayo se realizó con 240 pollos comerciales Ross 308, con diferentes niveles de anticuerpos maternales para la enfermedad de Newcastle, que fueron divididos en forma aleatoria en dos grupos. Las aves fueron mantenidas en condiciones, en aisladores con agua y alimento a discreción.
Un grupo conformado por 120 aves fue vacunado al día de vida con una dosis completa de la vacuna vectorizada (HVT-NDV) Vectormune ND por vía sub-cutánea, y las restantes 120 aves conformaron el grupo control no vacunado. Se tomaron 20 muestras de suero de cada grupo a las siguientes edades: 1, 7, 14, 21, 28, 35 y 42 días de vida para determinar el descenso del nivel de anticuerpos maternos para la enfermedad de Newcastle, y para evaluar el efecto de la respuesta inmune humoral luego de la vacunación. No se aplicaron otras vacunas durante el período de la prueba.

Resultados

Se consideró como límite de positividad para HI 2 log2. El límite de positividad para el kit de ELISA Idexx fue 398 y para el kit de ELISA BioChek fue 1148.
El nivel promedio de anticuerpos maternales para la enfermedad de Newcastle al día de vida para la prueba de HI (antígeno HB1 LaSota - 4 HAU) fue 6.4±0.91 log2. El promedio de anticuerpos maternales con el kit de ELISA Idexx fue 2172 y con el kit de ELISA BioChek fue 4284. Por lo tanto, todas las aves fueron seropositivas al nacimiento por los tres métodos analizados.
Con ambos métodos, HI y ELISA, se observaron diferencias significativas entre el nivel de anticuerpos de las aves vacunadas y no vacunadas desde los 21 días en adelante.
El título promedio de anticuerpos para la enfermedad de Newcastle de las aves del grupo control (no vacunado) cayeron por debajo del límite de positividad de la prueba de HI a los 28 días de vida y a los 14 días de vida con ambos kits de ELISA.
Los títulos de HI de las aves vacunadas fueron negativos a los 14, 21, 28 y 35 días de vida pero superaron el límite de positividad a los 42 días, alcanzando niveles moderados a la edad de faena. 

grafico 1

Los títulos de ELISA de las aves vacunadas fueron negativos en los muestreos realizados a los 14, 21 y 28 días de vida pero se observó una evidente seroconversión ya que alcanzaron niveles de positividad a partir de las 5 semanas de vida con el kit Idexx y de las 6 semanas de vida con el kit BioChek. Otro aspecto a destacar fue la uniformidad (CV muy bajos) observada en los títulos de los pollos vacunados luego de los 35 días de edad.

grafico 2

grafico 3

Determinación de la respuesta inmune

La respuesta inmune humoral a la vacunación fue detectada a partir de las tres semanas de vida, de acuerdo a la comparación del nivel de anticuerpos entre las aves del grupo vacunado y el control no vacunado con todos los métodos utilizados. En este ensayo se observaron diferencias entre las aves del grupo vacunado y no vacunado a partir de las cuatro semanas en adelante. El nivel de anticuerpos para la enfermedad de Newcastle en los pollos vacunados con la vacuna vectorizada Vectormune ND, observados a la edad de faena, es comparable con los títulos normalmente hallados en los programas de vacunación con vacunas vivas apatógenas en ausencia de exposición a virus de Newcastle de campo.
Es importante destacar que la respuesta serológica observada tanto con las pruebas de ELISA como con la prueba de HI permite la diferenciación entre las aves infectadas (o que tuvieron contacto con virus vivo de Newcastle) y las aves vacunadas; es decir, la utilización del concepto DIVA (Differenciate Infected from Vaccinated Animals) para determinar la presencia de desafíos de virus de campo.
La vacuna vectorizada Vectormune ND se caracteriza por el desarrollo de una respuesta inmune humoral sistémica, mediante la generación de IgG y local mediante la producción de IgA (detectable en lágrimas) así como una respuesta inmune celular, sin interferencia con los anticuerpos maternales ni reacciones post-vacunales.
En relación a la respuesta serológica, la vacuna induce niveles de anticuerpos detectables a la edad de faena de manera fiable en comparación con los controles no vacunados y permite el monitoreo de infecciones de campo.

 

 

 


 
Conservación de vacunas criogénicas

Medición del nivel de nitrógeno líquido

 Un juego completo del equipo de seguridad debe ser utilizado para trabajar adecuadamente y en forma segura con el nitrógeno líquido: zapatos cerrados, guantes criogénicos, pantalón sin dobladillos, delantal criogénico, careta facial y anteojos de seguridad.
El nivel de nitrógeno líquido debe ser medido, por lo menos, una vez a la semana en el termo que contiene vacunas, mediante la inmersión de la regla medidora a todo lo largo, evitando el hueco que se encuentra en su centro, como muestra la foto.
La regla medidora debe entrar lentamente dentro del termo para evitar que el nitrógeno líquido salpique, debido a la alta diferencia de temperatura. Asimismo, debe llegar hasta la base que está al fondo del termo (ver flecha azul) para tomar una adecuada medida del nivel de nitrógeno líquido.
Debido a que no es posible ver el fondo del termo cuando está lleno con nitrógeno líquido, se recomienda poner la regla pegada al borde de la entrada del termo dirigida hacia abajo y al fondo (ver flecha blanca).

termo

Permita que la regla permanezca en el fondo durante 10 segundos. Luego retírela y agítela por unos segundos varias veces para visualizar la parte congelada de la regla, que indica el nivel de nitrógeno líquido.

Después, se le puede restar 1 cm. para tener una medida más precisa del nivel de nitrógeno líquido (resta la fase del vapor).
(Ver línea amarilla de la foto).

delantal

Guía para mantener el adecuado nivel de nitrógeno líquido

Para largo período de almacenamiento (tanto en instalaciones de Ceva como en almacén destinado a vacunas criogénicas). Las canastillas siempre deben estar sumergidas en nitrógeno líquido, lo que significa que el nivel de nitrógeno líquido debe estar al menos a 28 cm (11 pulgadas).

 Los termos deben ser rellenados inmediatamente si el nivel llega a estar cerca de 28 cm, por lo que no pueden estar a nivel más abajo.

Para corto período de almacenamiento (incubadora)

 Mientras haya nitrógeno líquido en el termo, las vacunas se encuentran congeladas correctamente.

 -       De 38 cm a 15 cm (15 a 6 pulgadas): la conservación de las vacunas es buena.

 -       De 15 cm  7.5 cm (6 a 3 pulgadas): la conservación de las vacunas aún está segura pero el relleno debe hacerse pronto.

 -       Debajo de 7.5 cm (abajo de 3 pulgadas): la conservación de las vacunas está en peligro, el termo debe ser rellenado inmediatamente. Esta situación DEBE SER EVITADA.

 Use los indicadores impresos en la regla medidora.

En cualquier caso, recuerde que el rango de evaporación dado en las especificaciones técnicas de los termos corresponde a la evaporación observada cuando se cierra correctamente la tapa de éstos. Abrir el termo incrementa esta tasa, tanto como la frecuencia y la duración.

Nota de seguridad

Nunca use un tubo o cualquier herramienta hueca como regla de medición: el nitrógeno líquido “puede salpicar”.  Use siempre una regla específica para medir nitrógeno líquido.